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HS Mix(P2081-P2082)

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P2081(1 ml(40次,50 μl體系/次)) P2082(1 ml*5(200次,50 μl體系/次))

HS? Mix

Cat. #P2081,P2082

產品簡介

 HS? Mix濃縮的快速高效PCR預混合溶液,含有HS? Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等PCR擴增必需組分(模板與引物除外)。使用時,僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行PCR,大大簡化操作過程,縮短操作時間,降低污染(加樣次數減少)。HS? Mix的反應體系經特殊優化,減少引物二聚體的形成,顯著提高PCR擴增的特異性。同時,由于體系內含有增強劑,能夠顯著增強PCR擴增的靈敏度。

HS? Taq DNA聚合酶(高特異性Taq DNA聚合酶)是針對普通 Taq DNA聚合酶靈敏度高,易產生非特異性條帶的情況,專門研制的高特異性嗜熱DNA聚合酶產品。本產品的反應緩沖液的離子種類和濃度都經過改良,使得引物與模板的特異性結合力顯著增強,從而提高引物與模板結合的嚴謹性,減少非特異性擴增。實驗數據證明HS? Taq DNA聚合酶能顯著提高PCR擴增的特異性,降低背景,又能對長片段有較高的擴增效率。延伸速度為1min/kb70~75℃,簡單模板可達10s/kb)。該酶具有5'→3'聚合酶活性,無3'→5'外切酶活性。擴增產物具有3'-dA,可直接用于TA克隆。

產品組成

Component

P2081

P2082

2× HS? Mix

1 ml

1 ml× 5

超純水

1 ml

1 ml× 5

本產品分含體系中包含溴酚藍、不含溴酚藍兩類。體系中包含溴酚藍的產品,PCR擴增產物可直接電泳檢測。這兩類產品的擴增性能無差異。如無特別說明提供體系中包含溴酚藍的包裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢測:經質量檢測,產品不含脫氧核糖核酸內切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能檢測:PCR方法檢測無宿主殘余DNA,能有效擴增人基因組中的單拷貝基因。

應用舉例

1. 配制反應體系

請于冰上配置反應體系,體系大小與組分用量與添加順序可調整:

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

2× HS? Mix

25   μl

2

upstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

3

downstream   primer (10 μM)[1]

2 μl

0.4   μM

4

template   DNA[2]

1-4   μl

<1μg

5

超純水[3]

To   50 μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)/PCR   Enhancer[4]

Variable

-

[1] 引物終濃度建議范圍:0.1-1 μM。特異性差時可降低濃度,效率低時可提高濃度。

[2] 不同模板最佳用量不同,部分DNA模板建議用量如下表(50 μl反應體系)。

Template

人類基因組DNA

λDNA

大腸桿菌基因組DNA

質粒DNA

Dosage

0.1μg-1μg

0.5ng-5ng

10ng-100ng

0.1ng-10ng

[3] 可單獨訂購超純水(Cat. #P9021/P9022/P9023)。

[4] 可單獨訂購25mM MgCl2Cat. #P9031)和PCR EnhancerCat. #P9041)。

2. 設定反應程序進行PCR反應

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94℃

3   min

1

Denaturation

94℃

30   sec

25-35  

Annealing

55-68℃[1]

30   sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final   Extension

72℃

5-10   min

1

[1] 退火溫度應根據Tm值較低的引物來設。

[2] 延伸時間按1min/kb來設最佳(簡單模板可達10s/kb)。

3. 分析結果

反應產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳,通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要,可進行割膠回收。

無產物或產物量少的改進措施有:1調整退火溫度;2減少抑制劑的影響,如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分,需要高倍稀釋(1:;10000)后使用;3采用乙醇沉降洗脫,提高模板DNA的純度;4使用PCR添加劑,如PCR EnhancerCat. #P9041、MgCl2Cat. #P9031等可提高產量。

操作注意事項

1 室溫下HS? Taq DNA聚合酶有一定的活性,為避免發生非特異性擴增,請于冰上配置反應體系,并且最后添加模板DNA。

2 HS? DNA聚合酶具有脫氧核苷酸轉移酶活性,因此在PCR產物3'末端通常會加上1個多余的脫氧腺嘌呤核苷,可直接用于TA克隆。也可以使用HS? Mix進行加A反應。

3 堿基錯誤率是指在每個堿基合成過程中所摻入的錯誤核苷酸數目。HS? Taq DNA聚合酶的堿基錯誤率為1×10-5。

引物設計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間;上下游引物3末端避免互補,避免出現3個以上重復的GC,或出現發夾結構,否則會產生非特異性擴增;GC含量控制在40-60%,且上下游引物GC含量盡量接近;Tm值控制在55-65℃之間,且上下游引物Tm值盡量接近,額外附加序列(酶切位點、修飾等)是非模板匹配序列,不參與Tm值計算。

相關產品

名稱

貨號

規格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50/250

DSTM5000

M1111/M1112

60/300

高純度質粒小提試劑盒

N1011/N1012/N1013

50/100/200

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R1051

50

基因組DNA快速提取試劑盒

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更多PCR酶、DNA Marker及核酸提純類產品請登錄東盛生物官網查詢。

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