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PCR產物及DNA片段純化試劑盒(N1091-N1092-N1093)

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N1091(50次) N1092(100次) N1093(200次)

PCR產物及DNA片段純化試劑盒

 

產品組分

 

貨號

N1091

50次)

N1092

100次)

N1093

200次)

溶液BD

20 ml

40 ml

80 ml

溶液PE

15 ml

15 ml×2

20 ml×3

溶液Eluent

2.5 ml

5 ml

10 ml

DNA純化柱

50

100

200

說明書

1

1

1


溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

溶液BD中含有變性劑,請不要直接接觸皮膚。

上述產品組分均可單獨購買,詳見產品索引。


產品說明

本產品采用傳統的硅膠柱膜吸附技術,用于從PCR或其他各種酶促反應液中純化DNA片段(50 bp-10 kb)。其純化原理是硅膠膜柱高效可逆地吸附體系中的DNA片段(高鹽、低pH值),同時去除酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他雜質,被吸附的DNA再在低鹽、高pH值條件下被洗脫純化。一次可回收30μg高純度DNA片段,此DNA片段可直接用于各種酶促反應等。

 

質量控制
PCR擴增產物中純化50 bp1,000 bpDNA片段。

 

保存條件

室溫保存2年。

 

注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

●  溶液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入4倍體積的無水乙醇,即15 ml溶液PE中加入60 ml無水乙醇,20 ml溶液PE中加入80 ml無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。

本試劑盒適用于無選擇性的回收體系中所有的DNA 片段。如需選擇性回收特定片段,同時去除其他不同大小片段,建議選擇凝膠回收試劑盒。

本試劑盒純化柱的DNA吸附能力強。但如果DNA濃度小,或DNA初始量少,回收率將會偏低。

溶液Eluent10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直接用于各種酶促反應等,不會影響后續試驗。

為了保證回收效率,請不要使用未調整pH值的超純水洗脫目的片段。

請嚴格按照操作步驟操作。


操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

確定PCR反應液或其他酶促反應液的體積。將PCR反應液或其他酶促反應液轉移至一個新的1.5 ml離心管中,向其中加入等體積溶液BD,混合均勻。

將步驟1所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min。

    若溶液體積大于純化柱容積(700 μl),可分兩次加入。

3  12,000 rpm離心1min,棄濾液。

    此時DNA片段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

    溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

    此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫,以獲得高質量DNA片段。

加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

6  12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中的液體。

    此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續酶促反應。同時也利于DNA片段的充分溶解。

7  將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處,懸空滴加30-100 μl溶液Eluent60℃預熱),靜置2min。12,000 rpm離心1min,管底即為目的DNA片段。貯存于-20℃。

   溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的片段的多少、用戶對目的片段濃度要求而定。

   對溶液Eluent 65℃預熱,會提高提取DNA目的片段的產量。


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