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基因組DNA快速提取試劑盒(N1111-N1112)

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N1111(50次) N1112(100次)

基因組DNA快速提取試劑盒(硅膠膜離心柱法)

產品組分

 

貨號

N1111

50次)

N1112

100次)

消化緩沖液DS

15 ml

30 ml

裂解液MS

20 ml

40 ml

蛋白酶K20mg/ml

1 ml

2 ml

去蛋白液PS

30 ml

60 ml

漂洗液PE

15 ml

30 ml

純化液TE

5 ml

10 ml

DNA純化柱

 50

 100

說明書

1

1

 

裂解液MS中含變性劑,請不要直接接觸皮膚。

漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,

即含75%乙醇。

產品說明

本產品可用于昆蟲、線蟲、動物等樣本的基因組DNA純化。純化原理是利用細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA,由硅膠膜柱可逆吸附體系中的基因組DNA,經蛋白酶K消化、漂洗液清洗除去蛋白質、脂質以及多糖等雜質,用純化液洗脫獲得基因組DNA。一次可從不超過10 mg組織材料中提取到3-35 μg的高純度基因組DNAOD260/OD280=1.7-1.9),此基因組DNA可直接用于PCR、酶切等后續實驗。

 

質量控制

純化的基因組DNA質量通過限制性酶切和單拷貝基因的PCR擴增鑒定。

 

保存條件

蛋白酶K室溫運輸,于-20保存,避免反復凍融。

其余試劑置于室溫(15-25)干燥條件下保存1年。

如果消化緩沖液DSMS中有沉淀,可在55加熱溶解,待恢復室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA的純化效率。

 

注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

漂洗液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入3倍體積的無水乙醇,即15 ml漂洗液PE加入45 ml無水乙醇,30 ml漂洗液PE加入90 ml無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。

消化緩沖液DS和裂解液MS室溫保存可能會有沉淀產生,在55℃加熱溶解,待恢復至室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA純化效率。

應盡量使用新鮮的實驗材料,確保提取的基因組DNA不被降解。不能立刻提取基因組DNA 的實驗材料應盡快置于液氮或-80℃冰箱中保存并避免反復凍融。

使用液氮研磨組織材料時,應隨時加入液氮,確保提取的基因組DNA不被降解。

基因組DNA需長期保存時,建議使用純化液TE。用無菌的離心管分裝后保存于-20℃-80℃。

所有離心步驟均為室溫下進行。

請嚴格按照操作步驟操作。

 

操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

取少量樣本材料,放入液氮預冷的研缽中??焖儆昧ρ心サ耐瑫r加入少量液氮,直至樣本材料被研磨成粉末。將研磨好的樣本轉移至1.5 ml離心管中,每管組織材料含量應不超過10 mg。

如沒有液氮,可用剪刀剪成小塊,放入研缽或勻漿器中,加入適量TEpH 8.0),處理成細胞懸液。將不超過10 mg當量的細胞懸液轉移至一個新的1.5 ml的離心管中,12,000 rpm離心1min,棄上清,收集沉淀。

    每只離心管中的樣本當量不宜超過10 mg。每10 mg樣本材料可獲得10 μg基因組DNA。樣本量過大,將會影響細胞核裂解效率并可能堵塞純化柱,進而降低基因組DNA的得率與純度。

加入200 μl消化緩沖液DS,渦旋振蕩至形成完全均一的懸浮液。

    如需去除RNA,可加入4 μl RNase A100 mg/ml,N9042),振蕩15秒,室溫放置5min。

加入20 μl蛋白酶K,混勻,55℃水浴或金屬浴,至組織完全溶解,通常需要1-3小時。對特別難溶解的組織如尾巴、昆蟲可放置過夜。

加入220 μl裂解液MS,渦旋振蕩混勻。65℃溫浴10min。溶液應變清亮,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠,室溫放置5min使溶液冷卻。

    加入裂解液MS時可能會產生白色沉淀,一般65℃放置時會消失,不會影響后續實驗。如溶液未變清亮,說明細胞裂解不徹底,可能導致提取DNA量少和提取出的DNA不純。       

加入220 μl無水乙醇,上下顛倒混勻。此時可能出現絮狀沉淀。簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。將溶液及絮狀沉淀轉移到純化柱中。12,000 rpm離心1min,棄濾液。

   若溶液體積大于純化柱容積(700 μl),可分兩次離心。

此時基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

加入500 μl去蛋白液PS,12,000 rpm離心1min,棄濾液。

  此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的蛋白、脂質等雜質,以獲得高質量基因組DNA。

加入500μl漂洗液PE,12,000 rpm離心1min,棄濾液。

  漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋,即含75%乙醇。

加入500 μl漂洗液PE,12,000 rpm離心1min,棄濾液。

9  12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。

    此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續的酶促反應(PCR或酶切)。同時利于基因組DNA充分溶解。

10  將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處,懸空滴加30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。

11  12,000 rpm離心2min,管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

    洗脫液TE可用去離子水代替,但其pH需為8.0-8.5。

對洗脫液TE 65℃預熱,會提高基因組DNA的產量。


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