國產vs進口,熒光定量PCR預混液真實測評
欄目:精品推薦 發布時間:2019-11-14
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2款國際大牌,3款國內品牌,共5款探針法熒光定量PCR預混液,擴增效率與特異性真實測評。

國產vs進口,熒光定量PCR預混液真實測評

2019-11-14 

2款國際大牌,3款國內品牌,共5款探針法熒光定量PCR預混液,擴增效率與特異性真實測評。


實時熒光定量PCR(real-time qPCR)實驗在分子生物學研究中越來越普遍?,F在常用兩種熒光定量方法:SYBR Green I嵌合熒光染料法,和TaqMan探針法。染料法成本較低,使用方便,是最常用的熒光定量方法;探針法成本較高,但是定量結果更準確。



挑選一款質量好的擴增產品對于實驗結果有至關重要的作用。新手們對于如何判斷一款qPCR預混液的好壞有點迷茫,常常會出現一個誤區:擴增效率越高越好。


 


為什么不是效率越高越好?產物的特異性怎么判斷?國產品牌和進口品牌的差距在哪里?通過下面的實驗就可以看出來。

測評開始

5種品牌的TaqMan探針法熒光定量PCR預混液,同時用相同的模板DNA和引物進行擴增。擴增曲線如下:
 





 
可以看出擴增曲線都正常,除了國產品牌C的Ct值較大,即擴增效率較低外,其余4個品牌的Ct值均接近。但是它們真實地反映了目標產物的實時擴增情況嗎?
 


我們對以上qPCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳,根據產物大小可以直觀地判斷其特異性:
 
 
品牌A和品牌D的產物存在明顯的非特異性擴增;品牌C的產物大小不正確,完全是非特異性擴增;東盛生物(一款探針法和兩款染料法)和品牌B的產物是特異的。
 


通過對比我們發現,擴增效率不是越高越好,產物特異才是最重要的!


 
首次使用的引物,不論是進行染料法定量的,還是探針法定量的,都建議通過DNA電泳來直觀判斷其特異性。當然,染料法定量的特異性也可以借助熔解曲線來判斷。
 
以上只是我們對比測評的一組結果,綜合多次、多品牌、多類型的對比結果,從整體水平來看,進口大牌的qPCR預混液比國產品牌質量更可靠,但也不是全部都表現很好。



東盛生物qPCR Mix不斷優化升級,與眾多國際品牌對比均表現突出。



東盛生物熒光定量PCR預混液核心成分為類抗體技術修飾的熱啟動酶,完美平衡了特異性與擴增效率。


特異性過高會抑制擴增效率,擴增效率過高會降低特異性,因此保持特異性和擴增效率在一個平衡的位置是qPCR Mix的技術難題。


東盛生物擁有超過十年的PCR技術研發經驗,經過反復嘗試,不斷優化,得到了兼顧特異性與擴增效率的qPCR Mix。



部分客戶發表文獻如下:
Fengxia Tu, Qiongyi Pang, et, al. Angiogenic effects of apigenin on endothelial cells after hypoxia-reoxygenation via the caveolin-1 pathway. International Journal of Molecular Medicine. 2017; 40 (6): 1639-1648. DOI: 10.3892/ijmm.2017.3159.
Yaping Nie, Hu Chen, et, al. Palmdelphin promotes myoblast differentiation and muscle regeneration. Scientific Reports. 2017; 7 (1): 41608. DOI: 10.1038/srep41608.

 
廣州東盛生物科技有限公司(Dongsheng Biotech Co., Ltd)成立于2005年1月,是一家專注于研發、生產、銷售優質生命科學產品的高新技術企業。

公司產品線以PCR技術為核心,聚焦于普通PCR、qPCR、多重PCR,DNA電泳以及核酸純化等分子生物學技術。產品主要應用于基礎生命科學研究。

產品遠銷亞洲、歐洲和美洲等二十多個國家和地區,憑借優秀的產品質量和專業的技術支持,我們的產品獲得了極佳的國際口碑。


 
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